狂犬病主要是感染了狂犬病毒所致,狂犬病毒含5種主要蛋白,即糖蛋白(G)、核蛋白(N)、聚合酶(L)、磷蛋白(NS)及膜蛋白(M)等。糖蛋白能與乙酰膽堿結合,決定了狂犬病毒的噬神經性,能刺激抗體產生保護性免疫性反應。N蛋白導致的抗體不具中和力,可用檢測漿內包涵體有助臨床診斷。
1.血液檢查:白細胞總數自(12~30)×109/L不等,中性粒細胞百分率大多在80%以上,大單核細胞百分率亦可增加。
2. 尿常規檢查:常可發現輕度蛋白尿,偶有透明管型。
3.腦脊液檢測:其壓力在正常范圍或稍有增高,蛋白質輕度增高,細胞數稍增多,但很少超過200×106/L,主要為淋巴細胞。
4.免疫學試驗:
A)血清中和抗體或:對未注射過疫苗、抗狂犬病血清或免疫球蛋白者有診斷價值。缺點是在病程第8天前不易測出。接種過疫苗的患者,如中和抗體效價超過1∶5000時,對診斷狂犬病仍有價值,因僅注射疫苗者其抗體效價較低。近來亦有采用ELISA進行抗體檢測。
B)熒光抗體測定:即狂犬病毒抗原檢測。應用熒光抗體檢查腦組織涂片、角膜印片、冷凍皮膚切片中的病毒抗原,發病前即可獲得陽性結果。方法簡便,數小時內可完成,且與小鼠腦內接種檢查內氏小體方法有較高的符合率,因此是實際應用價值較大的一種試驗。在有經驗的實驗室中,免疫熒光試驗的可靠性可達95%以上。最近采用快速狂犬病酶鏈免疫吸附診斷法(rapid rabies enzyme immuno diagnosis,RREID)可用于檢測腦組織中狂犬病毒抗原,只需肉眼觀察或酶標儀測定結果即可,如陽性反應顯示橘黃色,陰性反應則無色,甚為快速簡便。
5.病毒分離 從患者腦組織、脊髓、涎腺、淚腺、肌肉、肺、腎、腎上腺、胰腺等臟器和組織雖可分離到病毒,但機會均不多,自腦脊液和唾液中則更不易分離出病毒;患者的存活時間越長,病毒的分離也越困難。分離病毒可采用組織培養或動物接種,分離出病毒后可用中和試驗加以鑒定。
6.腦組織動物接種與檢查 均于死后進行,動物接種為將死者腦組織制成10%混懸液接種于小鼠腦內(2~3周齡的乳鼠較成年鼠為敏感),陽性者小鼠于6~8天內出現震顫、豎毛、尾強直、麻痹等現象,10~15天內因衰竭而死亡。死亡小鼠腦組織切片中可發現內氏小體。
以死者腦組織或咬人動物死亡后的腦組織作病理切片或壓片,用Seller染色及直接免疫熒光法檢查內氏小體,陽性率可達70%。
7.反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測狂犬病毒核酸 為了能檢側大多數狂犬病毒和狂犬相關病毒,可選擇狂犬病毒核蛋白基因(N)中最保守區域設計引物:N1( )(587)5’-TTTTGAGACTGCTCCTTTTTG-3’(605),N2(-)(1029)5’-CCCATATAGCATCCTAC-3’(1013)。取腦組織或病毒感染細胞,先獲得病毒RNA。N1引物用于合成cDNA,然后進行PCR反應,瓊脂糖凝膠電泳檢測結果。
常規應做X線胸片、B超、心電圖、腦CT檢查。